ELISA (test immuno-enzymatique lié à l'enzyme) est un test de biochimie analytique largement utilisé qui utilise des anticorps et un changement de couleur pour détecter la présence et la quantité d'un antigène cible dans un échantillon. Les agents de blocage jouent un rôle crucial dans ELISA, car ils aident à réduire la liaison non spécifique, ce qui peut conduire à des résultats faux positifs et à des données inexactes. En tant que fournisseur ELISA, on me pose souvent des questions sur les agents de blocage couramment utilisés à ELISA. Dans ce blog, je présenterai certains des agents de blocage les plus fréquemment utilisés et leurs caractéristiques.
1. Albumine sérique bovine (BSA)
L'albumine sérique bovine est l'un des agents de blocage les plus populaires d'Elisa. Il s'agit d'une grande protéine globulaire qui est relativement peu coûteuse et facilement disponible. La BSA fonctionne en se liant aux sites inoccupés restants à la surface de la microplaque après l'antigène ou l'anticorps a été immobilisé. Cela empêche les autres protéines de l'échantillon ou les réactifs de détection de se lier non - spécifiquement à la plaque.
La BSA est compatible avec une large gamme de systèmes de détection, y compris les anticorps injurés et fluorescents enzymes. Il peut être utilisé dans divers types d'ELISA, tels que ELISA directement, indirecte, sandwich et compétitif. Une concentration typique de BSA utilisée pour le blocage est entre 1% et 5% dans une solution tampon, comme la solution saline tamponnée au phosphate (PBS).
Cependant, BSA a certaines limites. Certains échantillons peuvent contenir des anticorps contre la BSA, ce qui peut conduire à des résultats faux positifs. De plus, dans certains cas, la BSA peut interférer avec la liaison de l'antigène cible à l'anticorps, surtout si l'antigène a une affinité élevée pour la BSA.
2. Lait sèche non gras
Le lait sèche non gras est un autre agent de blocage couramment utilisé. Il s'agit d'une alternative efficace à la BSA et est riche en caséine et dans d'autres protéines. Les protéines du lait sèche non gras peuvent bloquer efficacement les sites de liaison non spécifiques sur la microplaque.
Le lait sèche non gras est souvent utilisé à une concentration de 2% à 5% dans une solution tampon. Il convient à de nombreuses applications ELISA, mais il n'est pas recommandé pour une utilisation avec les tests de détection des phosphoprotéines car les protéines du lait contiennent des phosphates, ce qui peut interférer avec la détection des protéines phosphorylées.
L'un des avantages du lait sèche non gras est qu'il peut améliorer le rapport signal / bruit dans certains tests ELISA. Cependant, il peut contenir des protéases qui peuvent dégrader les anticorps ou les antigènes dans le test, surtout si l'étape de blocage est effectuée pendant une période prolongée à température ambiante.
3. Gélatine
La gélatine est une protéine dérivée du collagène. C'est un bon agent de blocage car il forme une fine couche sur la surface de la microplaque, ce qui peut empêcher la liaison non spécifique. La gélatine est souvent utilisée à une concentration de 0,1% à 1% dans une solution tampon.
La gélatine est compatible avec de nombreux systèmes de détection et peut être utilisée dans différents types d'ELISA. Il est particulièrement utile dans les tests où l'échantillon contient une concentration élevée de protéines, car elle peut réduire le bruit de fond causé par des interactions protéiques-protéines non spécifiques.
Cependant, la gélatine peut ne pas être aussi efficace que le BSA ou le lait séchain non gras dans certains cas, en particulier lorsque la microplaque a une capacité de liaison élevée. De plus, les solutions de gélatine doivent être préparées fraîches, car elles peuvent soutenir la croissance des micro-organismes au fil du temps.
4. Caseine
La caséine est la principale protéine du lait. Il peut être utilisé comme agent de blocage sous forme de caséine pure ou dans le cadre du lait sec non gras. La caséine a une affinité élevée pour la surface de la microplaque et peut bloquer efficacement les sites de liaison non spécifiques.
La caséine est souvent utilisée à une concentration de 1% à 2% dans une solution tampon. Il convient à de nombreuses applications ELISA, mais comme le lait séchage non gras, il n'est pas recommandé pour les tests de détection de phosphoprotéines. La caséine peut fournir un bon équilibre entre le blocage de l'efficacité et l'efficacité des coûts.
5. Bloquer des tampons
Il existe également des tampons de blocage disponibles dans le commerce qui sont formulés spécifiquement pour ELISA. Ces tampons contiennent souvent une combinaison de différents agents de blocage, tels que la BSA, la caséine et d'autres additifs, pour fournir des performances de blocage optimales.
Les tampons de blocage disponibles dans le commerce sont pratiques à utiliser, car ils sont pré-formulés et prêts à l'emploi. Ils peuvent gagner du temps et des efforts en laboratoire. Certains tampons de blocage sont également conçus pour être compatibles avec des systèmes de détection spécifiques ou des types d'ELISA.
Lors du choix d'un agent de blocage, plusieurs facteurs doivent être pris en compte. Il s'agit notamment du type d'ELISA, de la nature de l'échantillon, du système de détection et du coût. Il est souvent nécessaire d'optimiser l'étape de blocage en testant différents agents de blocage et concentrations pour obtenir les meilleurs résultats.
En plus d'utiliser l'agent de blocage approprié, la qualité de l'équipement utilisé dans ELISA affecte également les résultats du test. Par exemple, unProcesseur Auto ELISApeut automatiser le processus ELISA, réduire l'erreur humaine et améliorer la reproductibilité du test. UNThermo-microplate shakerPeut assurer un mélange uniforme des réactifs, ce qui est crucial pour des résultats précis. Et unLecteur de microplaques ELISAest utilisé pour mesurer l'absorbance ou la fluorescence des échantillons, fournissant des données quantitatives pour le test.
En tant que fournisseur ELISA, nous proposons une large gamme d'agents de blocage de haute qualité, ainsi que l'équipement nécessaire pour ELISA. Nos produits sont conçus pour répondre aux besoins de différents laboratoires et projets de recherche. Si vous êtes intéressé à acheter nos produits ELISA ou à avoir des questions sur ELISA, n'hésitez pas à nous contacter pour l'approvisionnement et la négociation. Nous nous engageons à vous fournir les meilleurs produits et services pour soutenir vos recherches.
Références
- Harlow, E. et Lane, D. (1988). Anticorps: un manuel de laboratoire. Cold Spring Harbor Laboratory Press.
- Voller, A., Bidwell, DE et Bartlett, A. (1979). L'enzyme a lié un test immuno-orbant (ELISA). Laboratoires Dynatech.
- Crowther, Jr (2001). Le guide ELISA. Humana Press.